Zanim zaczniesz budować swoje szkiełka, upewnij się, że masz wszystko, czego będziesz potrzebował, w tym szkiełka, szkiełka nakrywkowe, zakraplacze lub pipety i wszelkie chemikalia lub barwniki, których planujesz użyć.
Będziesz używał dwóch głównych typów szkiełek, 1) zwykłe płaskie szkiełka szklane, i 2) szkiełka wgłębne lub dołkowe. Prowadnice studzienne mają małą studzienkę lub wgłębienie w środku, aby utrzymać kroplę wody lub substancji płynnej. Są one droższe i zwykle używane bez szkiełek nakrywkowych.
Standardowe szkiełka mogą być plastikowe lub szklane i mają rozmiar 1 x 3 cale (25 x 75 mm) i grubość 1 do 1,2 mm.
Slajdy mokre wykorzystują szkiełko nakrywkowe lub szkło nakrywkowe, bardzo cienki kwadratowy kawałek szkła (lub plastiku), który umieszcza się nad kroplą próbki. Bez pokrywy napięcie powierzchniowe spowodowałoby, że kropla ułożyłaby się w kopułę. Osłona przerywa to napięcie, spłaszczając próbkę i umożliwiając bardzo bliską inspekcję przy minimalnym ogniskowaniu. Osłona służy również do ochrony obiektywu przed interferencją z kroplą próbki.
MONTAŻ
Są cztery popularne sposoby montażu szkiełek mikroskopowych opisane poniżej:
Montaż suchy
W montażu suchym, próbka jest umieszczana bezpośrednio na szkiełku. Szkiełko nakrywkowe może być użyte w celu utrzymania próbki na miejscu i ochrony obiektywu. Oprawy suche są odpowiednie dla próbek takich jak: pyłki, włosy, pióra lub materiały roślinne.
Oprawy mokre
W oprawach mokrych, kropla wody jest używana do zawieszenia próbki pomiędzy szkiełkiem podstawowym a szkiełkiem nakrywkowym. Umieścić próbkę na szkiełku podstawowym. Używając pipety, umieścić kroplę wody na próbce. Następnie umieść krawędź szkiełka nakrywkowego nad próbką i ostrożnie opuść szkiełko nakrywkowe na miejsce, używając wykałaczki lub jej odpowiednika. Ta metoda pomoże zapobiec uwięzieniu pęcherzyków powietrza pod preparatem.
Twoim celem jest uzyskanie wystarczającej ilości wody do wypełnienia przestrzeni pomiędzy preparatem a preparatem. Jeśli wody jest zbyt dużo, preparat będzie się ślizgał. Wziąć kawałek ręcznika papierowego i przytrzymać go blisko jednej krawędzi szkiełka nakrywkowego. W ten sposób odciągniesz trochę wody. Jeśli jest zbyt suchy, dodaj kroplę wody obok paska. Ćwicz to, aż się przyzwyczaisz.
Mokre montaże są odpowiednie do badania organizmów związanych z wodą, takich jak paramecium lub płynów ustrojowych, takich jak ślina, krew i mocz.
Oprawa sekcyjna
W oprawie sekcyjnej używany jest bardzo cienki przekrój próbki. Używając mikrotomu, wytnij cienki plasterek wybranego okazu, np. cebuli, i ostrożnie umieść go na szkiełku. Następnie należy postępować zgodnie z instrukcjami dla suchego lub mokrego montażu. Barwnik może być nałożony bezpośrednio na próbkę przed przykryciem jej szkiełkiem nakrywkowym.
Oprawy sekcyjne są odpowiednie dla szerokiej gamy próbek takich jak owoce, warzywa i inne ciała stałe, które mogą być cięte na małe plasterki.
Wymaz
Wymaz jest wykonywany poprzez ostrożne rozmazanie cienkiej warstwy próbki na szkiełku podstawowym i następnie nałożenie szkiełka nakrywkowego. Zazwyczaj rozmaz powinien być pozostawiony do wyschnięcia na powietrzu przed nałożeniem barwnika.
Barwniki
Barwniki są używane do pomocy w identyfikacji różnych typów komórek przy użyciu mikroskopu świetlnego. Nadają one obrazowi więcej kontrastu i pozwalają na klasyfikację komórek według ich kształtu (morfologii). Używając wielu różnych barwników, można wybiórczo zabarwić różne obszary, takie jak ściana komórkowa, jądro lub cała komórka. Plamy mogą również pomóc w rozróżnieniu żywych lub martwych komórek.
Barwniki mają tendencję do grupowania jako neutralne, kwaśne lub zasadowe, w zależności od ich składu chemicznego i będą przyciągać lub odpychać różne organizmy odpowiednio. Na przykład, naukowcy i pracownicy służby zdrowia używają błękitu metylenowego, lekko zasadowego barwnika, aby ujawnić obecność kwasu dezoksyrybonukleinowego, bardziej znanego jako DNA.
Rodzaje barwników
Jodyna jest jednym z bardziej powszechnie dostępnych barwników i jest używana do identyfikacji skrobi w różnych próbkach. Barwi ona węglowodany w próbkach roślinnych i zwierzęcych na kolor brązowy lub niebiesko-czarny. Glikogen zabarwi się na czerwono.
Błękit metylenowy jest zasadowym barwnikiem przydatnym do identyfikacji kwaśnych jąder komórkowych i DNA w próbkach zwierząt, bakterii i krwi. Jest również przydatny w akwariach, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się infekcji grzybiczych u ryb. Zobacz więcej szczegółów >
Eozyna Y jest barwnikiem kwaśnym, który barwi na różowo komórki zasadowe (np. cytoplazmę). Barwi na czerwono komórki krwi, cytoplazmę i błony komórkowe. Najważniejsze zastosowania medyczne Eozyny to badanie krwi i szpiku kostnego, w tym wymaz PAP. Zobacz więcej szczegółów >
Barwa Grama jest jednym z najczęściej stosowanych procesów w identyfikacji bakterii – używanym codziennie w szpitalach. Jest to podstawowy test, który szybko i efektywnie dzieli bakterie na jeden z dwóch typów: Gram dodatnie lub Gram ujemne. Zobacz więcej szczegółów >
KROKI POBIERANIA
- Przygotuj szkiełko do hodowli na mokro.
- Zbierz kroplę barwnika za pomocą zakraplacza lub pipety.Umieścić kroplę barwnika na zewnętrznej krawędzi szkiełka nakrywkowego.
- Przyłożyć kawałek serwetki lub ręcznika papierowego do przeciwległej strony szkiełka nakrywkowego, tuż przy krawędzi. Pomoże to wciągnięciu plamy pod szkiełko nakrywkowe i w poprzek preparatu.
- Może być konieczne dodanie kolejnej kropli, aby zapewnić całkowite pokrycie.
- Slajd jest gotowy do oglądania.
.