Na tym rysunku autorstwa francuskiego artysty Jacquesa le Moyne de Morgues, Timucua uciekają przed hiszpańskimi osadnikami, którzy przybyli statkiem. Le Moyne mieszkał w Forcie Caroline, francuskiej placówce, zanim Hiszpanie zniszczyli kolonię w 1562 r.
Hiszpania zdobyła przyczółek na dzisiejszej Florydzie, postrzegając ten obszar i ziemie na północ jako logiczne przedłużenie swojego karaibskiego imperium. W 1513 roku Juan Ponce de León zażądał dla hiszpańskiej korony obszaru wokół dzisiejszego St. Augustine, nazywając ten teren Pascua Florida (Święto Kwiatów lub Wielkanoc) na cześć najbliższego święta. Ponce de León nie był w stanie założyć tam stałej osady, ale w 1565 roku Hiszpania potrzebowała placówki, by stawić czoła francuskim i angielskim prywatnym żeglarzom, którzy używali Florydy jako bazy wypadowej do atakowania obładowanych skarbami hiszpańskich statków płynących z Kuby do Hiszpanii. Zagrożenie dla hiszpańskich interesów przybrało nowy obrót w 1562 roku, kiedy grupa francuskich protestantów (hugenotów) założyła małą osadę, którą nazwali Fort Caroline, na północ od St. Z upoważnienia króla Filipa II, hiszpański szlachcic Pedro Menéndez poprowadził atak na Fort Caroline, zabijając większość kolonistów i niszcząc fort. Likwidacja fortu Caroline służyła Hiszpanom do dwóch celów – pomogła zmniejszyć niebezpieczeństwo ze strony francuskich prywatniaków i wyeliminowała francuskie zagrożenie dla hiszpańskich roszczeń do tego obszaru. Rywalizacja o Florydę ilustruje, jak europejskie współzawodnictwo przeniosło się do obu Ameryk, zwłaszcza konflikt religijny między katolikami a protestantami.
W 1565 roku zwycięski Menéndez założył St. Augustine, obecnie najstarszą europejską osadę w obu Amerykach. W trakcie tego procesu Hiszpanie wyparli miejscowych Indian Timucua z ich starożytnego miasta Seloy, które istniało od tysięcy lat. Timucua bardzo cierpieli z powodu chorób wprowadzonych przez Hiszpanów, a ich populacja zmniejszyła się z około 200.000 przed kontaktem z Hiszpanami do pięćdziesięciu tysięcy w 1590 roku. Do roku 1700 pozostało tylko tysiąc Timucua. Podobnie jak na innych obszarach hiszpańskiego podboju, katoliccy księża starali się doprowadzić do duchowego podboju, zmuszając ocalałych Timucua, zdemoralizowanych i cierpiących z powodu katastrofalnych strat w rodzinie i społeczności, do przejścia na katolicyzm.
Hiszpańska Floryda stanowiła zachęcający cel dla imperialnych rywali Hiszpanii, zwłaszcza Anglików, którzy chcieli uzyskać dostęp do Karaibów. W 1586 r. hiszpańscy osadnicy w St. Augustine odkryli, że są podatni na ataki, gdy angielski pirat Sir Francis Drake zniszczył miasto z flotą dwudziestu statków i stu ludzi. Przez następne kilkadziesiąt lat Hiszpanie budowali kolejne drewniane forty, z których wszystkie zostały spalone przez najeżdżających europejskich rywali. W latach 1672-1695 Hiszpanie zbudowali kamienny fort, Castillo de San Marcos, aby lepiej bronić St. Augustine przed rywalami.
ński fort Castillo de San Marcos pomógł hiszpańskim kolonistom w St. Augustine odeprzeć grasujących prywatniaków z konkurencyjnych krajów europejskich.