Antes de começar a construir as suas lâminas, certifique-se de que tem tudo o que vai precisar, incluindo lâminas, lâminas de cobertura, conta-gotas ou pipetas e quaisquer produtos químicos ou manchas que planeia usar.
Vocês irão usar dois tipos principais de lâminas, 1) a lâmina de vidro plana comum, e 2) a depressão ou lâminas de poço. As lâminas de poços têm um pequeno poço, ou indentação, no centro para segurar uma gota de água ou substância líquida. São mais caras e normalmente usadas sem uma lâmina de cobertura.
Duas lâminas padrão podem ser de plástico ou vidro e têm 1 x 3 polegadas (25 x 75 mm) de tamanho e 1 a 1,2 mm de espessura.
Duas lâminas húmidas usarão uma lâmina de cobertura ou vidro de cobertura, um pedaço quadrado muito fino de vidro (ou plástico) que é colocado sobre a gota de amostra. Sem a tampa no lugar, a tensão superficial faria com que a gota se amontoasse numa cúpula. A cobertura quebra esta tensão, achatando a amostra e permitindo uma inspecção muito próxima com uma focalização mínima. A cobertura serve também para proteger a lente objectiva de interferir com a gota de amostra.
MOUNTS
Existem quatro formas comuns de montar uma lâmina de microscópio, como descrito abaixo:
Dry Mount
Numa montagem seca, a amostra é colocada directamente sobre a lâmina. Uma lâmina de cobertura pode ser utilizada para manter a amostra no lugar e para ajudar a proteger a lente objectiva. Os suportes secos são adequados para amostras tais como amostras de pólen, cabelo, penas ou materiais vegetais.
Montagem húmida
Numa montagem húmida, uma gota de água é utilizada para suspender a amostra entre a lâmina e o escorregamento da tampa. Colocar uma amostra sobre a lâmina. Utilizando uma pipeta, colocar uma gota de água sobre a amostra. Em seguida, colocar no bordo da lâmina sobre a amostra e baixar cuidadosamente a lâmina com um palito de dentes ou equivalente. Este método ajudará a evitar que as bolhas de ar fiquem presas por baixo do deslizamento da tampa.
Seu objectivo é ter água suficiente para preencher o espaço entre o deslizamento da tampa e a lâmina. Se houver demasiada água, o deslizamento da tampa deslizará. Pegar num pedaço de papel toalha e segurá-lo perto de uma extremidade do deslizamento da tampa. Isto irá retirar um pouco de água. Se estiver demasiado seco, adicionar uma gota de água ao lado do talão da tampa. Pratique isto até se habituar.
montagens húmidas são adequadas para estudar organismos ligados à água, tais como o paramécio ou fluidos corporais, tais como saliva, sangue e urina.
Secção Montagem
Numa secção de montagem, é utilizada uma secção transversal extremamente fina de uma amostra. Utilizando um micrótomo, corte uma fina fatia do espécime seleccionado, como uma cebola, e coloque-a cuidadosamente na lâmina. Depois, siga as instruções para uma montagem seca ou húmida. Uma mancha pode frequentemente ser aplicada directamente na amostra antes de ser coberta com uma lâmina de cobertura.
A montagem da secção é adequada para uma grande variedade de amostras, tais como fruta, vegetais e outros sólidos que podem ser cortados em pequenas fatias.
Folha
Um esfregaço é feito através da aplicação cuidadosa de uma fina camada da amostra através de uma lâmina e depois da aplicação de uma lâmina de cobertura. Normalmente, um esfregaço deve ser deixado secar ao ar antes de se aplicar uma mancha.
STAINS
P>Pujões são usadas para ajudar a identificar diferentes tipos de células usando microscópios de luz. Dão mais contraste à imagem e permitem que as células sejam classificadas de acordo com a sua forma (morfologia). Utilizando uma variedade de diferentes manchas, é possível manchar selectivamente diferentes áreas, tais como uma parede celular, núcleo, ou a célula inteira. As manchas podem também ajudar a diferenciar entre células vivas ou mortas.
As manchas tendem a ser agrupadas como neutras, ácidas ou básicas, dependendo da sua composição química e irão atrair ou repelir diferentes organismos em conformidade. Por exemplo, cientistas e profissionais de saúde utilizam Azul de Metileno, uma mancha ligeiramente alcalina, para revelar a presença de ácido desoxirribonucleico, mais comummente conhecido como ADN.
Tipos de manchas
Iodo é uma das manchas mais comuns e é utilizada para identificar amido numa variedade de amostras. Manchará os hidratos de carbono em plantas e espécimes animais castanhos ou negros-azulados. O glicogénio aparecerá como vermelho.
Azul de etileno é uma mancha alcalina útil na identificação de núcleos de células ácidas e DNA em amostras de animais, bactérias ou sangue. É também útil em aquários para prevenir a propagação de infecções fúngicas em peixes. Ver mais detalhes >
Eosina Y é uma mancha ácida que cora cor-de-rosa para células alcalinas (citoplasma, por exemplo). Coloração vermelha para células sanguíneas, citoplasma e membranas celulares. Os usos médicos mais importantes da Eosina são em testes de sangue e medula óssea, incluindo o esfregaço de PAP. Ver mais detalhes >
Gram’s Stain é um dos processos mais frequentemente utilizados na identificação de bactérias – utilizado diariamente nos hospitais. É um teste primário que divide rapidamente e de forma rentável as bactérias em um de dois tipos: Gram positivo ou Gram negativo. Ver mais detalhes >
PASSOS DE ESTAVAGEM
- Preparar uma lâmina de montagem húmida.
- Colher uma gota de mancha com um conta-gotas ou pipeta.
- Coloque uma gota de nódoa numa extremidade externa da lâmina de cobertura.
- Coloque um pedaço de guardanapo ou toalha de papel contra o lado oposto da lâmina de cobertura, mesmo contra a extremidade. Isto ajudará a desenhar a mancha por baixo da capa e através do espécime.
- Pode ser necessário adicionar outra gota para garantir uma cobertura completa.
- A lâmina está agora pronta para ser vista.