Voordat je begint met het maken van je glaasjes, zorg er dan voor dat je alles hebt wat je nodig hebt, inclusief glaasjes, dekglaasjes, druppelaars of pipetten en eventuele chemicaliën of kleurstoffen die je van plan bent te gebruiken.
Je zult twee hoofdtypen glaasjes gebruiken, 1) het gewone platte glaasje, en 2) de depressie- of putjesglaasjes. De putjesglaasjes hebben een klein putje in het midden, waarin een druppel water of een vloeibare stof kan worden opgevangen. Ze zijn duurder en worden meestal zonder dekglaasje gebruikt.
Standaardglaasjes kunnen van plastic of glas zijn en zijn 25 x 75 mm groot en 1 tot 1,2 mm dik.
Natte glaasjes worden afgedekt met een dekglaasje of dekglaasje, een heel dun vierkant stukje glas (of plastic) dat over de druppel van het monster wordt geplaatst. Zonder het dekglaasje zou de druppel zich door de oppervlaktespanning ophopen tot een koepel. Het kapje doorbreekt deze spanning, maakt het monster plat en maakt zeer nauwkeurige inspectie met minimale scherpstelling mogelijk. Het deksel dient ook om de objectieflens te beschermen tegen interferentie met de druppel.
MONTEREN
Er zijn vier gebruikelijke manieren om een objectglaasje te monteren, zoals hieronder beschreven:
Dry Mount
In een dry mount, wordt het preparaat direct op het glaasje geplaatst. Een dekglaasje kan worden gebruikt om het preparaat op zijn plaats te houden en om de objectieflens te beschermen. Droogbedden zijn geschikt voor preparaten zoals pollen, haar, veren of plantaardig materiaal.
Nat mount
In een nat preparaat wordt een druppel water gebruikt om het preparaat tussen het objectglaasje en het dekglaasje te houden. Plaats een preparaat op het glaasje. Doe met een pipet een druppel water op het preparaat. Plaats vervolgens de rand van het dekglaasje over het monster en laat het dekglaasje voorzichtig op zijn plaats zakken met behulp van een tandenstoker of iets dergelijks. Deze methode helpt voorkomen dat er luchtbellen onder het dekglaasje terechtkomen.
Het is de bedoeling dat er voldoende water is om de ruimte tussen het dekglaasje en het objectglaasje te vullen. Als er te veel water is, zal het dekglaasje gaan schuiven. Neem een stuk keukenrol en houd dit dicht bij een rand van het dekglaasje. Dit zal wat water wegzuigen. Als het te droog is, voeg dan een druppel water toe naast het dekglaasje. Oefen dit totdat je eraan gewend bent.
Wet mounts zijn geschikt voor het bestuderen van watergebonden organismen zoals paramecium of lichaamsvloeistoffen zoals speeksel, bloed en urine.
Doorsnede-inbedding
Bij een doorsnede-inbedding wordt een uiterst dunne doorsnede van een preparaat gebruikt. Snijd met behulp van een microtoom een dun plakje van het gekozen preparaat, bijvoorbeeld een ui, en leg dit voorzichtig op het objectglaasje. Volg vervolgens de instructies voor droog of nat inbedden. Een kleurstof kan vaak direct op het preparaat worden aangebracht voordat het met een dekglaasje wordt afgedekt.
Insectiemontages zijn geschikt voor een grote verscheidenheid van monsters zoals fruit, groenten en andere vaste stoffen die in kleine plakjes kunnen worden gesneden.
Smear
Een uitstrijkje wordt gemaakt door voorzichtig een dunne laag van het preparaat over een glaasje uit te strijken en vervolgens een dekglaasje aan te brengen. Gewoonlijk moet een uitstrijkje aan de lucht kunnen drogen voordat een kleurstof wordt aangebracht.
Vlekken
Vlekken worden gebruikt om verschillende soorten cellen te identificeren met lichtmicroscopen. Ze geven het beeld meer contrast en maken het mogelijk cellen in te delen op basis van hun vorm (morfologie). Door verschillende kleurstoffen te gebruiken, kunt u selectief verschillende gebieden kleuren, zoals een celwand, een kern of de hele cel. Vlekken kunnen ook helpen onderscheid te maken tussen levende en dode cellen.
Soorten worden gegroepeerd in neutrale, zure of basische groepen, afhankelijk van hun chemische samenstelling, en zullen dienovereenkomstig verschillende organismen aantrekken of afstoten. Wetenschappers en gezondheidswerkers gebruiken bijvoorbeeld methyleenblauw, een licht alkalische kleurstof, om de aanwezigheid van desoxyribonucleïnezuur, beter bekend als DNA, aan te tonen.
Soorten vlekken
Iodium is een van de meer algemeen verkrijgbare vlekken en wordt gebruikt om zetmeel te identificeren in een verscheidenheid van monsters. Het kleurt koolhydraten in planten en dierlijke specimens bruin of blauwzwart. Glycogeen wordt rood.
Methyleenblauw is een alkalische kleurstof die nuttig is voor de identificatie van zure celkernen en DNA in dierlijke, bacteriële of bloedmonsters. Het is ook nuttig in aquaria om de verspreiding van schimmelinfecties bij vissen te voorkomen. Zie meer details >
Eosine Y is een zure kleuring die roze kleurt voor basische cellen (cytoplasma, bijvoorbeeld). Het kleurt rood voor bloedcellen, cytoplasma en celmembranen. De belangrijkste medische toepassingen van Eosine zijn bloed- en beenmergonderzoek, met inbegrip van het PAP-uitstrijkje. Zie meer details >
Gram’s Stain is een van de meest gebruikte processen voor het identificeren van bacteriën – dagelijks gebruikt in ziekenhuizen. Het is een primaire test die bacteriën snel en kosteneffectief indeelt in een van de twee typen: Gram positief of Gram negatief. Zie meer details >
STAANDE STAPPEN
- Prepareer een objectglaasje voor natte preparatie.
- Vang een druppel vlek op met een oogdruppelaar of pipet.
- Leg een druppel vlek op een buitenrand van uw dekglaasje.
- Leg een stukje servet of een papieren handdoekje tegen de tegenoverliggende kant van uw dekglaasje, recht tegen de rand. Dit helpt de vlek onder het dekglaasje en over het preparaat te trekken.
- Het kan nodig zijn nog een druppel toe te voegen om een volledige dekking te verzekeren.
- Het glaasje is nu klaar om bekeken te worden.