Study of interaction of carprofen and its enantiomers with human serum albumin–I. Meccanismo di legame studiato con metodi di dialisi e spettroscopici

Il legame del carprofen, un farmaco antinfiammatorio non steroideo della classe dell’acido arilpropionico, e dei suoi enantiomeri all’albumina di siero umano (HSA) è stato studiato con metodi di dialisi e spettroscopici. I parametri di legame ottenuti con metodi diversi erano in stretto accordo. Il legame di carprofen a HSA con entrambi i metodi di fluorescenza e dialisi di equilibrio (ED) è caratterizzato da due serie di costanti di associazione. L’enantiomero S(+)- del carprofen ha mostrato un’affinità leggermente superiore per l’HSA rispetto al suo corrispondente antipodo con entrambi i metodi. Diverse analisi del legame all’HSA hanno suggerito la presenza di un sito ad alta affinità e da cinque a sette siti a bassa affinità per il carprofen e i suoi enantiomeri sull’HSA. I dati di spostamento in fluorescenza implicavano che il carprofene si lega principalmente al sito II, il sito della benzodiazepina, mentre il sito a bassa affinità del carprofene è il sito I, il sito della warfarina. I dati del dicroismo circolare hanno suggerito diversi meccanismi per l’alta affinità e la bassa affinità del legame del carprofene all’HSA. I dati sono coerenti con la maggior parte dell’energia di legame al sito II essendo interazioni elettrostatiche e idrofobiche, mentre per il legame a bassa affinità, interazioni idrofobiche. Il legame era esotermico, guidato dall’entropia e spontaneo, come indicato dalle analisi termodinamiche. Dai dati di legame con i derivati dell’HSA modificati chimicamente, è probabile che i residui di tirosina, lisina e istidina siano particolarmente coinvolti nel legame del carprofene all’HSA, ed è molto probabile che il legame ad alta affinità del carprofene si trovi nella parte N-terminale del dominio III o in quella sezione della proteina più la parte C-terminale del dominio II della molecola HSA. Quando il legame del carprofene all’HSA è stato confrontato con il legame dell’estere metilico del carprofene all’HSA (K = 0,1 x 10(6) M-1), il gruppo carbossilico del carprofene è risultato svolgere un ruolo importante soprattutto nel legame ad alta affinità del carprofene all’HSA. L’alta affinità del carprofen all’HSA era indipendente dai cambiamenti conformazionali sull’HSA causati dalla transizione N-B.