Prima di iniziare a costruire i tuoi vetrini, assicurati di avere tutto il necessario, compresi i vetrini, i vetrini coprioggetto, i contagocce o le pipette e qualsiasi prodotto chimico o colorante che hai intenzione di usare.
Utilizzerai due tipi principali di vetrini, 1) il comune vetrino piatto e 2) i vetrini a depressione o a pozzetto. I vetrini a pozzetto hanno un piccolo pozzetto, o rientranza, al centro per contenere una goccia d’acqua o una sostanza liquida. Sono più costosi e di solito vengono usati senza un vetrino coprioggetto.
I vetrini standard possono essere di plastica o di vetro e sono grandi 1 x 3 pollici (25 x 75 mm) e spessi da 1 a 1,2 mm.
I vetrini umidi useranno un vetrino coprioggetto, un pezzo quadrato molto sottile di vetro (o plastica) che viene posto sopra la goccia del campione. Senza il coperchio, la tensione superficiale causerebbe il raggruppamento della goccia in una cupola. Il coperchio rompe questa tensione, appiattendo il campione e permettendo un’ispezione molto ravvicinata con una messa a fuoco minima. Il coperchio serve anche a proteggere l’obiettivo dall’interferire con la goccia del campione.
MONTAGGI
Ci sono quattro modi comuni per montare un vetrino da microscopio come descritto di seguito:
Montaggio a secco
In un montaggio a secco, il campione è posto direttamente sul vetrino. Un vetrino coprioggetto può essere usato per mantenere il campione in posizione e per aiutare a proteggere l’obiettivo. Le montature a secco sono adatte ad esemplari come campioni di polline, capelli, piume o materiali vegetali.
Montaggio a umido
In una montatura a umido, una goccia d’acqua viene usata per sospendere l’esemplare tra il vetrino e il coprivetrino. Posizionare un campione sul vetrino. Usando una pipetta, mettere una goccia d’acqua sul campione. Quindi posizionare il bordo del vetrino coprioggetto sopra il campione e abbassare attentamente il vetrino coprioggetto in posizione utilizzando uno stuzzicadenti o un altro strumento equivalente. Questo metodo aiuterà ad evitare che le bolle d’aria rimangano intrappolate sotto il vetrino coprioggetto.
Il vostro obiettivo è quello di avere acqua sufficiente a riempire lo spazio tra il vetrino coprioggetto e il vetrino. Se c’è troppa acqua, il vetrino coprioggetto scivolerà. Prendere un pezzo di tovagliolo di carta e tenerlo vicino a un bordo del vetrino coprioggetto. Questo farà uscire un po’ d’acqua. Se è troppo asciutto, aggiungi una goccia d’acqua accanto al vetrino coprioggetto. Fate pratica fino a quando non vi sarete abituati.
I wet mount sono adatti per studiare organismi legati all’acqua come i parameci o fluidi corporei come saliva, sangue e urina.
Montaggio in sezione
In un montaggio in sezione, viene usata una sezione trasversale estremamente sottile di un campione. Usando un microtomo, tagliate una fetta sottile del vostro campione selezionato, come una cipolla, e mettetela attentamente sul vostro vetrino. Poi segui le istruzioni per un montaggio a secco o a umido. Un colorante può spesso essere applicato direttamente al campione prima di coprirlo con un vetrino coprioggetto.
I montaggi a sezione sono utili per un’ampia varietà di campioni come frutta, verdura e altri solidi che possono essere tagliati in piccole fette.
Smear
Uno striscio è fatto spalmando attentamente un sottile strato del campione su un vetrino e poi applicando un vetrino coprioggetto. In genere, uno striscio dovrebbe essere lasciato asciugare all’aria prima di applicare una colorazione.
STAINS
I coloranti sono usati per aiutare a identificare diversi tipi di cellule usando il microscopio ottico. Danno all’immagine più contrasto e permettono di classificare le cellule in base alla loro forma (morfologia). Usando una varietà di coloranti diversi, è possibile colorare selettivamente aree diverse come la parete cellulare, il nucleo o l’intera cellula. Le macchie possono anche aiutare a differenziare tra cellule vive o morte.
Le macchie tendono ad essere raggruppate come neutre, acide o basiche, a seconda della loro composizione chimica e attireranno o respingeranno diversi organismi di conseguenza. Per esempio, gli scienziati e i professionisti della salute usano il blu di metilene, un colorante leggermente alcalino, per rivelare la presenza di acido desossiribonucleico, più comunemente noto come DNA.
Tipi di coloranti
Lo iodio è uno dei coloranti più comunemente disponibili ed è usato per identificare l’amido in una varietà di campioni. Colora i carboidrati nelle piante e nei campioni animali di marrone o blu-nero. Il glicogeno si mostrerà rosso.
Il blu di metilene è un colorante alcalino utile per identificare i nuclei di cellule acide e il DNA in campioni di animali, batteri o sangue. È anche utile negli acquari per prevenire la diffusione di infezioni fungine nei pesci. Vedi altri dettagli >
L’eosina Y è una macchia acida che si colora di rosa per le cellule alcaline (citoplasma, per esempio). Colora di rosso le cellule del sangue, il citoplasma e le membrane cellulari. Gli usi medici più importanti dell’eosina sono i test del sangue e del midollo osseo, compreso lo striscio PAP. Vedi altri dettagli >
La macchia di Gram è uno dei processi più utilizzati per l’identificazione dei batteri – usato quotidianamente negli ospedali. È un test primario che divide rapidamente ed economicamente i batteri in uno dei due tipi: Gram positivi o Gram negativi. Vedi altri dettagli >
FASI DI MONTAGGIO
- Preparare un vetrino a montaggio umido.
- Raccogliere una goccia di macchia con un contagocce o una pipetta.
- Porre una goccia di macchia su un bordo esterno del vetrino coprioggetto.
- Porre un pezzo di tovagliolo o di carta assorbente contro il lato opposto del vetrino coprioggetto, proprio contro il bordo. Questo aiuterà a disegnare la macchia sotto la copertura e attraverso il campione.
- Potrebbe essere necessario aggiungere un’altra goccia per garantire una copertura completa.
- Il vetrino è ora pronto per la visualizzazione.