Avant de commencer à construire vos lames, assurez-vous d’avoir tout ce dont vous aurez besoin, y compris les lames, les lamelles couvre-objet, les compte-gouttes ou les pipettes et les produits chimiques ou les colorants que vous prévoyez d’utiliser.
Vous utiliserez deux types principaux de lames, 1) la lame de verre plate commune, et 2) les lames à dépression ou à puits. Les lames à puits ont un petit puits, ou une indentation, au centre pour contenir une goutte d’eau ou de substance liquide. Elles sont plus chères et généralement utilisées sans lamelle couvre-objet.
Les lames standard peuvent être en plastique ou en verre et ont une taille de 1 x 3 pouces (25 x 75 mm) et une épaisseur de 1 à 1,2 mm.
Les lames humides utiliseront une lamelle couvre-objet ou un verre couvre-objet, une pièce carrée très fine en verre (ou en plastique) qui est placée sur la goutte d’échantillon. Sans le couvercle en place, la tension de surface ferait en sorte que la goutte se regroupe en un dôme. Le couvercle brise cette tension, aplatit l’échantillon et permet une inspection très rapprochée avec une mise au point minimale. Le couvercle sert également à protéger la lentille de l’objectif pour qu’elle n’interfère pas avec la goutte d’échantillon.
MOUNTS
Il existe quatre façons courantes de monter une lame de microscope, comme décrit ci-dessous :
Montage à sec
Dans un montage à sec, l’échantillon est placé directement sur la lame. Une lamelle couvre-objet peut être utilisée pour maintenir le spécimen en place et pour aider à protéger l’objectif. Les montages secs conviennent aux spécimens tels que les échantillons de pollen, de cheveux, de plumes ou de matières végétales.
Montage humide
Dans un montage humide, une goutte d’eau est utilisée pour suspendre le spécimen entre la lame et la lamelle couvre-objet. Placez un échantillon sur la lame. À l’aide d’une pipette, déposez une goutte d’eau sur le spécimen. Placez ensuite le bord de la lamelle couvre-objet sur l’échantillon et abaissez soigneusement la lamelle couvre-objet en place à l’aide d’un cure-dent ou équivalent. Cette méthode permettra d’éviter que des bulles d’air soient piégées sous le lamelle couvre-objet.
Votre objectif est d’avoir suffisamment d’eau pour remplir l’espace entre la lamelle couvre-objet et la lame. S’il y a trop d’eau, le lamelle couvre-objet va glisser. Prenez un morceau de papier absorbant et tenez-le près d’un bord de la lamelle. Cela permettra d’extraire un peu d’eau. Si elle est trop sèche, ajoutez une goutte d’eau à côté de la lamelle. Pratiquez cela jusqu’à ce que vous vous y habituiez.
Les montages humides conviennent à l’étude d’organismes liés à l’eau, comme la paramécie, ou de fluides corporels, comme la salive, le sang et l’urine.
Montage en coupe
Dans un montage en coupe, on utilise une section transversale extrêmement fine d’un spécimen. À l’aide d’un microtome, coupez une fine tranche de votre spécimen sélectionné, comme un oignon, et posez-la soigneusement sur votre lame. Suivez ensuite les instructions pour un montage sec ou humide. Une coloration peut souvent être appliquée directement sur le spécimen avant de le recouvrir d’une lamelle couvre-objet.
Les montages en coupe sont utiles pour une grande variété d’échantillons tels que les fruits, les légumes et autres solides qui peuvent être coupés en petites tranches.
Le frottis
Un frottis est réalisé en étalant soigneusement une fine couche du spécimen sur une lame et en appliquant ensuite une lamelle couvre-objet. Typiquement, un frottis doit être laissé sécher à l’air libre avant d’appliquer une coloration.
Taches
Les taches sont utilisées pour aider à identifier différents types de cellules à l’aide de microscopes optiques. Elles donnent plus de contraste à l’image et permettent de classer les cellules en fonction de leur forme (morphologie). En utilisant une variété de colorants différents, vous pouvez colorer sélectivement différentes zones telles qu’une paroi cellulaire, un noyau ou la cellule entière. Les colorants peuvent également aider à différencier les cellules vivantes ou mortes.
Les colorants ont tendance à être regroupés comme neutres, acides ou basiques, en fonction de leur composition chimique et attireront ou repousseront différents organismes en conséquence. Par exemple, les scientifiques et les professionnels de la santé utilisent le bleu de méthylène, une teinture légèrement alcaline, pour révéler la présence d’acide désoxyribonucléique, plus communément appelé ADN.
Types de teinture
L’iode est l’une des teintures les plus couramment disponibles et est utilisée pour identifier l’amidon dans une variété d’échantillons. Elle colorera les glucides des plantes et des spécimens animaux en brun ou bleu-noir. Le glycogène apparaîtra en rouge.
Le bleu de méthylène est une coloration alcaline utile pour identifier les noyaux cellulaires acides et l’ADN dans les échantillons d’animaux, de bactéries ou de sang. Il est également utile dans les aquariums pour prévenir la propagation des infections fongiques chez les poissons. Voir plus de détails >
L’éosine Y est une coloration acide qui colore en rose les cellules alcalines (cytoplasme, par exemple). Elle colore en rouge les cellules sanguines, le cytoplasme et les membranes cellulaires. Les utilisations médicales les plus importantes de l’éosine concernent les analyses de sang et de moelle osseuse, notamment le frottis PAP. Voir plus de détails >
La coloration de Gram est l’un des procédés les plus fréquemment utilisés pour identifier les bactéries – utilisé quotidiennement dans les hôpitaux. Il s’agit d’un test primaire qui divise rapidement et de manière rentable les bactéries en deux types : Gram positif ou Gram négatif. Voir plus de détails >
Étapes de la coloration
- Préparer une lame de montage humide.
- Collecter une goutte de coloration avec un compte-gouttes ou une pipette.
- Posez une goutte de teinture sur un bord extérieur de votre lame de couverture.
- Placez un morceau de serviette en papier ou de serviette en papier contre le côté opposé de votre lame de couverture, juste contre le bord. Cela aidera à attirer la teinture sous la lamelle couvre-objet et sur le spécimen.
- Vous devrez peut-être ajouter une autre goutte pour assurer une couverture complète.
- La lame est maintenant prête à être observée.