Intervalos de referencia relacionados con la edad para los niveles de inmunoglobulina y subconjuntos de linfocitos en niños indios Narula G, Khodaiji S, Bableshwar A, Bindra MS

Resumen

Antecedentes: En los niños, la inmunidad innata y adaptativa varía con la edad, el estado de la enfermedad y el origen étnico, lo que se refleja en los subconjuntos de linfocitos y los niveles de inmunoglobulina (Ig) en suero. La escasez de estos datos en el subcontinente indio hizo necesario este estudio. Objetivos: Este estudio pretende determinar los rangos de referencia de Ig y subconjuntos de linfocitos en niños indios desde el nacimiento hasta los 5 años. Entorno y diseño: Se seleccionaron neonatos, lactantes y niños de un hospital de atención terciaria y se clasificaron en 5 grupos desde la sangre del cordón umbilical/recién nacidos hasta los 5 años. Materiales y métodos: Se tomaron muestras de sangre de cordón umbilical y de niños sanos de hasta 5 años de edad. Se estudiaron los recuentos sanguíneos completos, los niveles séricos de Ig (por turbidimetría) y los subconjuntos de linfocitos (por citometría de flujo), y se calcularon los rangos de referencia. Resultados: Se analizaron 43 muestras, 53 de sangre de cordón umbilical y 350 de niños de 1 mes a 5 años. Se observaron niveles elevados de IgG al nacer, que disminuyeron en los primeros 6 meses, seguidos de un aumento a partir de entonces. Los niveles de IgM se mantuvieron bajos en la infancia y alcanzaron su máximo a los 13-36 meses. Los niveles de IgA eran muy bajos al nacer pero aumentaban con la edad. Los recuentos de CD4 fueron elevados en la sangre del cordón umbilical hasta los 3 años de edad y luego disminuyeron. Los recuentos de CD8 y CD19 se mantuvieron estables hasta los 5 años de edad. El CD56 aumentó a partir de los 2 años. Conclusiones: Mientras que nuestros datos se correlacionan bien con la literatura publicada, las diferencias notables fueron los niveles más altos de IgM observados en el grupo de edad de 1-3 años y las células asesinas naturales más altas a través de todos los grupos de edad en nuestro estudio. Nuestros resultados proporcionan la mayor base de datos de este tipo de nuestro país.

Palabras clave: Recuento celular absoluto, citometría de flujo, perfil linfocítico, subconjuntos linfocíticos, inmunoglobulinas séricas

Cómo citar este artículo:
Narula G, Khodaiji S, Bableshwar A, Bindra MS. Intervalos de referencia relacionados con la edad para los niveles de inmunoglobulina y subconjuntos de linfocitos en niños indios. Indian J Pathol Microbiol 2017;60:360-4

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Narula G, Khodaiji S, Bableshwar A, Bindra MS. Intervalos de referencia relacionados con la edad para los niveles de inmunoglobulina y subconjuntos de linfocitos en niños indios. Indian J Pathol Microbiol 2017 ;60:360-4. Disponible en: https://www.ijpmonline.org/text.asp?2017/60/3/360/215390

Introducción

La edad pediátrica está cargada de predisposición a las infecciones. La principal defensa del huésped contra la infección implica la inmunidad innata, que responde independientemente de la exposición previa al agente e incluye el complemento, las interleucinas y los componentes celulares. El componente celular comprende los fagocitos/macrófagos, neutrófilos, células dendríticas, mastocitos, eosinófilos, basófilos y células asesinas naturales (células NK). Éstas identifican y eliminan los patógenos por contacto y engullimiento son inespecíficas y no confieren una inmunidad duradera.
La inmunidad adquirida (adaptativa) es una respuesta altamente específica en la que participan los linfocitos T y B y las células NK. Esta respuesta está mediada por dos mecanismos principales, la inmunidad celular por parte de los linfocitos T, y la inmunidad humoral con la producción de inmunoglobulinas (Ig) por parte de 5 subtipos funcionalmente distintos de células B. La síntesis comienza en la vida fetal y procede de forma variable según el tipo de Ig, la exposición al antígeno, la raza y la etnia. Las anomalías del sistema inmunitario pueden causar una mayor susceptibilidad a las infecciones y a otras afecciones como la alergia, la autoinmunidad y la malignidad. La estimación de los niveles de Ig en suero y los recuentos y porcentajes absolutos de los subconjuntos de linfocitos ayuda a realizar un diagnóstico y un tratamiento tempranos de dichas afecciones. Sin embargo, se dispone de muy pocos rangos de referencia específicos por edad para estos parámetros en la India. Los disponibles se refieren en su mayoría a personas de raza blanca o, en el mejor de los casos, incluyen minorías étnicas de esta región. La probabilidad de que haya diferencias raciales se ha establecido en al menos un gran estudio asiático. No es apropiado extrapolar estos resultados a los niños del subcontinente indio, que son mucho más diversos étnicamente y crecen en entornos y medios socioeconómicos muy diferentes a los de sus homólogos occidentales. La escasez de rangos de referencia en niños indios sanos condujo al presente estudio, cuyo objetivo era determinar los intervalos de referencia de los niveles de Ig y los subconjuntos de linfocitos de la sangre periférica en la sangre del cordón umbilical y en niños desde el nacimiento hasta los 5 años de edad.

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Materiales y métodos

La población del estudio estaba formada por neonatos nacidos en un hospital de atención terciaria (de los que se recogió sangre del cordón umbilical) y por bebés y niños que acudían a las clínicas de bebés sanos o a los departamentos de consultas externas del mismo centro. Se dividieron en 5 categorías de edad:

1. Sangre de cordón umbilical de recién nacidos a término
2. Los bebés tempranos (1-6 meses)
3. Los bebés tardíos (7-12 meses)
4. Los niños pequeños (13-36 meses)
5. Los niños en edad preescolar (37-60 meses).

Los criterios de inclusión fueron:

1. Sangre de cordón de partos normales a término sin complicaciones prenatales ni antecedentes familiares de inmunodeficiencias o neoplasias
2. Los lactantes y niños pequeños normales que acudían a la clínica de bebés sanos
3. Niños que acudían al departamento de consultas externas por molestias no relacionadas con infecciones (por ejemplo, fracturas) pero por lo demás en aparente buen estado de salud determinado por la historia y la exploración de rutina
4. Niños en visitas de seguimiento, más de 2 semanas después de la recuperación de infecciones infantiles rutinarias autolimitadas, como infecciones víricas del tracto respiratorio superior o un episodio solitario de una enteritis vírica autolimitada
5. Pacientes en visitas de seguimiento por trastornos quirúrgicos que no estaban relacionados con infecciones de ninguna manera y que se habían curado/recuperado completamente.

Los criterios de exclusión fueron:

1. Cualquier episodio solitario de una infección sistémica del sistema de órganos en el pasado, por ejemplo, neumonía
2. Todos los casos de enfermedades infecciosas, como fiebre tifoidea, malaria, paperas, sarampión, varicela, y hepatitis
3. Niños con infecciones del tracto respiratorio superior (URTIs) – si el número de infecciones virales autolimitadas superó las 10 en los 12 meses anteriores o si tuvieron algún episodio asociado de faringitis piógena otitis supurativa o sinusitis
4. Niños con infecciones del tracto gastrointestinal – si el número de infecciones virales autolimitadas superaba 1 en los 12 meses anteriores o si se producía un episodio de diarrea bacteriana, parasitaria o fúngica
5. Todos los casos de infecciones parasitarias o fúngicas
6. Casos con síntomas o síndromes atópicos
7. Pacientes con antecedentes de neoplasia.

Se tomó el consentimiento informado y una historia detallada de los padres, y se realizó un examen exhaustivo del niño. Las muestras de sangre del cordón umbilical se recogieron de la placenta en la sala de partos/el quirófano inmediatamente después del parto en 2 vacutainer de ácido etilendiaminotetraacético y 1 estéril. Las muestras venosas se recogieron en el departamento de pacientes externos. Los recuentos sanguíneos completos se realizaron con un contador celular automatizado, ABX Pentra ™ modelo no-120. Los niveles de Ig en suero se estimaron por el método turbidométrico utilizando el turbidímetro automatizado Quantiamate ™ de Tulip Diagnostics Pvt Ltd®. La determinación de los marcadores de la superficie celular se realizó mediante citometría de flujo de doble láser de cuatro colores utilizando el FACSCalibur™ fabricado por Becton Dickinson Biosciences ®. Se utilizaron tubos TruCount Multitest para estimar los subconjuntos de linfocitos. Las muestras que no pudieron ser analizadas inmediatamente se almacenaron hasta 24 h a 18 a 22°C antes de su evaluación.

Resultados

Se analizaron un total de 403 muestras, de las cuales 53 eran muestras de sangre de cordón umbilical y 350 eran de niños de entre 1 mes y 5 años, divididas en subconjuntos según la edad . La proporción entre hombres y mujeres fue de 1,1:1.

Tabla 1: Perfil demográfico de la población de sujetos Haga clic aquí para ver

Los niveles de inmunoglobulina sérica
La media de los niveles de IgG sérica era alta en la sangre del cordón umbilical (978mg/dL) disminuyendo hasta un nadir de 611,2 mg/dL al final de la infancia y luego aumentando hasta los niveles de adulto al 5º año de vida y .

Tabla 2: Niveles séricos de IgG, IgM, e IgA en mg/dL (n=403) Haga clic aquí para ver

Figura 1: Niveles de inmunoglobulina sérica a diferentes edades Haga clic aquí para ver

Los niveles de IgM sérica eran bajos en la sangre del cordón umbilical (media de 22.4 mg/dL) y aumentaron gradualmente hasta los 5 años de edad. Sin embargo, en el tercer año de vida, se observó una amplia dispersión con valores elevados (media de 289,6 mg/dl).
Los niveles medios de IgA eran muy bajos en la sangre del cordón umbilical (media de 3,35 mg/dl), pero aumentaron de forma constante y lineal hasta los 5 años de edad y.
Perfil linfocitario
Los recuentos absolutos de CD4 eran elevados en la sangre del cordón umbilical y se mantuvieron en el mismo nivel hasta los 3 años de edad y, a partir de entonces, comenzaron a disminuir. Los recuentos de CD8 son bajos en la sangre del cordón umbilical, pero aumentaron a los 6 meses, tras lo cual se mantuvieron estables hasta los 5 años de edad. Los recuentos de CD3 fueron altos al nacer, reflejando los elevados recuentos de CD4, y siguieron el patrón de los recuentos de CD4 en todos los grupos de edad. Sin embargo, no fue posible enumerar las células NK en la sangre del cordón umbilical debido a problemas técnicos, pero eran bajas al nacer y empezaron a aumentar a partir de los 2 años de edad. Los linfocitos B medidos por CD19 también eran bajos en la infancia y aumentaban gradualmente con la edad .

Tabla 3: Recuentos absolutos de subconjuntos de linfocitos por edad en células/cmm (n=403, para CD16/56, n=350) Haga clic aquí para ver

Discusión

La inmunidad innata y adaptativa son necesarias para combatir las infecciones infantiles causadas por diversos patógenos. Por lo tanto, las anomalías de la función inmunitaria primaria o adquirida pueden causar morbilidad y mortalidad graves. La estimación de los niveles de Ig en suero y de los subconjuntos de linfocitos ayuda a evaluar la respuesta inmunitaria y también la necesidad de intervención. Los estudios realizados en todo el mundo han demostrado que los niveles de Ig varían no sólo con la edad, sino también en las distintas regiones geográficas, por lo que se realizó este estudio para determinar los rangos de referencia específicos de la edad para estos parámetros en los niños indios. El tamaño de la muestra era adecuado para los subgrupos analizados. En nuestro estudio, incluimos a 138 (39%) niños con infecciones infantiles rutinarias que se habían resuelto más de 2 semanas antes de la recogida de la muestra de acuerdo con nuestros criterios de inclusión/exclusión.

En el primer estudio de este tipo sobre los niveles de Ig en suero, Collins-Williams et al. estudiaron a 200 niños utilizando la técnica de Hyland Immunoplate y encontraron IgG que oscilaban entre 346 mg% en 2-6 meses y 645 mg% en 2-5 años de edad. Estos niveles fueron inferiores a los de 941 mg% y 1487 mg%, respectivamente, en nuestro estudio. Esto podría deberse al mayor número de infecciones infantiles rutinarias incluso en niños por lo demás sanos de nuestra población. Los niveles de IgA e IgM, sin embargo, eran comparables. Ambos estudios muestran un aumento de los niveles séricos de Ig con la edad. Sin embargo, debido a las diferencias en la técnica, las comparaciones deben hacerse con precaución, especialmente porque la técnica de Hyland Immunoplate está ahora obsoleta. Otro estudio similar en niños y adultos realizado por Stoop et al. en 1969 mostró un aumento gradual de los niveles de Ig sérica con la edad; sin embargo, los rangos de referencia diferían de otros estudios de la época, siendo la razón principal la falta de una referencia internacional establecida para la determinación de Ig en ese momento.,,
En nuestro estudio, los niveles de IgG sérica se elevaron en la sangre del cordón umbilical y en la primera infancia, lo que indica una transferencia transplacentaria pasiva desde la madre, que está ampliamente documentada. La IgG confiere inmunidad pasiva frente a infecciones comunes en la infancia. En la infancia posterior, los niveles de IgG disminuyeron y alcanzaron un nadir a los 7-12 meses, seguido de valores progresivamente crecientes, un fenómeno bien conocido., Nuestros datos son comparables con estos estudios, con algunas diferencias notables.

Tabla 4: Comparación de los valores de IgG específicos por edad (mg/dL) con otros estudios Haga clic aquí para ver

En otro estudio, Lockitch et al. agruparon a todos los niños menores de 1 año en un solo grupo, lo que hizo que las diferencias entre subgrupos fueran incomparables. Los rangos superiores de IgG en ambos estudios comparados son mucho más bajos en el grupo de edad de 1 a 5 años que el nuestro, mientras que los rangos inferiores se mantienen más cercanos entre sí . Esto puede ser el resultado del mayor número de infecciones recientes, aunque de naturaleza rutinaria y más de 2 semanas después de la recuperación, en nuestros pacientes.
Los niveles de IgM fueron bajos en la sangre del cordón umbilical (media de 22 mg/dL) y mostraron un aumento gradual con los niveles más altos en el grupo de edad de 13 a 36 años (media de 289 mg/dL) similar a los patrones conocidos. Los niveles bajos en la sangre del cordón umbilical pueden reflejar la incapacidad de la IgM para atravesar la barrera placentaria. El aumento de los niveles de IgM en la edad de 13 a 36 meses se corresponde con una mayor incidencia de infecciones en este grupo de edad.

Los niveles de IgA también eran bajos en la sangre del cordón umbilical, similares a los niveles de IgM, pero aumentaron más gradualmente y mantuvieron un nivel estable en la infancia después de los 3 años de edad. Otros han observado un patrón de aumento similar.
Los cambios específicos de la edad en los niveles de Ig en suero en nuestro estudio con sus diferencias individuales se representan en el diagrama de dispersión consolidado.
Los subconjuntos de linfocitos analizados por citometría de flujo mostraron que los niveles de recuentos absolutos de CD4 eran altos en la sangre del cordón umbilical, se mantuvieron en los mismos niveles hasta los 3 años de edad y disminuyeron a partir de entonces. Dos estudios importantes sobre este aspecto han mostrado una tendencia similar., .

Tabla 5: Comparación de los recuentos absolutos de CD4 en células/cmm con otros estudios Click here to view

En nuestro estudio, los recuentos de CD4 han disminuido desde una media de 2932 células/μL en la infancia hasta 1977 células/μL a los 3-5 años. Es de destacar que los valores siguen siendo comparables con los de estos estudios a pesar de la política de inmunización universal con BCG al nacer, que estaba en el 100% de nuestra población de estudio. Ésta se administra de forma rutinaria en la India y es un conocido estimulante de las células T.
Los recuentos absolutos de células CD8 eran bajos en la sangre del cordón umbilical (media de 836 células/μL), pero aumentaron después del nacimiento (media de 1544 células/μL), tras lo cual se mantuvieron en un nivel estable hasta los 5 años de edad. Dos estudios importantes demostraron tendencias similares, aunque uno de ellos mostró un descenso constante en los recuentos de CD8 y CD3 totales después de 3 años., Los recuentos absolutos de CD3 fueron elevados al nacer, reflejando los elevados recuentos de CD4 y siguieron el patrón de estos últimos en todos los grupos de edad, un patrón bien establecido en la literatura occidental.,, Los recuentos de células NK (CD16/56) fueron bajos al nacer (media de 15,8 células/μL) y aumentaron gradualmente con la edad (media de 103 y 556 células/μL a los 1-3 y 2-5 años, respectivamente), lo que se compara con los escasos datos disponibles sobre esta línea celular. Otro estudio de la India sobre subconjuntos de linfocitos T contaba con 138 niños, pero abarcaba grupos de edad de entre 3 y 15 años, por lo que no era realmente comparable con nuestros datos.
Las células CD19 mostraron un pico en la primera infancia y disminuyeron a partir de entonces, manteniéndose estables hasta los 5 años de edad. Otros estudios mostraron un patrón similar hasta los 5 años de edad, seguido de un descenso constante hasta la edad adulta. El pico en la primera infancia se relaciona, con toda probabilidad, con las múltiples vacunaciones que estimulan los linfocitos B en este periodo.

Las diferentes tasas de descenso de los subconjuntos de linfocitos conducen a una discordancia en sus porcentajes y ratios con la edad, como se observó en nuestro estudio. Esto se ha puesto de manifiesto en un amplio estudio compuesto por individuos desde la infancia hasta la edad adulta y es especialmente relevante para estudiar las variaciones en las inmunodeficiencias, incluida la infección pediátrica por el VIH.
En vista de la alta incidencia de infecciones víricas leves recurrentes en los niños del grupo de edad de 1 a 5 años, incluimos deliberadamente a niños con estas afecciones pero que se habían recuperado 2 semanas antes de la recogida de la muestra para poder llegar a un rango de referencia más realista para los niños. Las infecciones más comunes fueron las respiratorias, seguidas de las gastrointestinales. La mayoría de las infecciones se produjeron en el grupo de edad de 13 a 36 meses.
Los elevados niveles de IgM y de IgA en los niños de 13 a 36 meses reflejan la respuesta inmunitaria debida a la exposición a agentes infecciosos, que es común a esta edad en nuestro país.
Los elevados recuentos absolutos de linfocitos en la infancia en nuestro estudio se deben probablemente al paso transplacentario de linfocitos T, que contribuyen a la inmunidad mediada por células y al autorreconocimiento regulado por células T en la vida fetal.
Los valores absolutos obtenidos en este estudio constituyen el mayor banco de datos de este tipo de la India y son indicativos de las tendencias de estos parámetros en niños indios de diferentes etnias y pueden constituir un rango de referencia útil para el subcontinente.

Conclusiones

• Los niveles séricos de IgSe obtuvieron los niveles normales de Ig en suero específicos de la sangre del cordón umbilical y de niños indios sanos desde el nacimiento hasta los 5 años de edad como referencia estándar. Los niveles de inmunoglobulina de los niños indios variaron con respecto a otras poblaciones, aunque las tendencias fueron comparables
• Subconjuntos de linfocitos específicos por edad de niños normales se obtuvieron de la sangre del cordón umbilical hasta los 5 años de edad. Las tendencias fueron comparables con las de otras poblaciones, aunque los valores absolutos y el rango difirieron en los niños indios
• Este estudio proporciona los datos más amplios y representativos de este tipo en niños indios sanos de amplia diversidad étnica
• Los llamados niños sanos suelen tener infecciones leves URTI que pueden alterar los niveles de Ig y los recuentos de linfocitos. Por lo tanto, hemos establecido rangos de referencia normalizados para niños que son más realistas que establecer intervalos de referencia en niños completamente sanos.

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