Antes de empezar a montar sus portaobjetos, asegúrese de que tiene todo lo que va a necesitar, incluyendo portaobjetos, cubreobjetos, cuentagotas o pipetas y cualquier producto químico o tinte que piense utilizar.
Utilizará dos tipos principales de portaobjetos, 1) el portaobjetos de vidrio plano común, y 2) los portaobjetos de depresión o pozo. Los portaobjetos de pozo tienen un pequeño pozo, o hendidura, en el centro para contener una gota de agua o sustancia líquida. Son más caros y normalmente se utilizan sin un cubreobjetos.
Los portaobjetos estándar pueden ser de plástico o de vidrio y tienen un tamaño de 1 x 3 pulgadas (25 x 75 mm) y un grosor de 1 a 1,2 mm.
Los portaobjetos húmedos utilizarán un cubreobjetos o cristal de cobertura, una pieza cuadrada muy fina de vidrio (o plástico) que se coloca sobre la gota de muestra. Sin el cubreobjetos, la tensión superficial haría que la gota se agrupara en una cúpula. La cubierta rompe esta tensión, aplanando la muestra y permitiendo una inspección muy cercana con un enfoque mínimo. El cubreobjetos también sirve para proteger la lente del objetivo para que no interfiera con la gota de la muestra.
MONTAJES
Hay cuatro formas comunes de montar un portaobjetos de microscopio, como se describe a continuación:
Montaje en seco
En un montaje en seco, la muestra se coloca directamente en el portaobjetos. Se puede utilizar un cubreobjetos para mantener la muestra en su sitio y ayudar a proteger la lente del objetivo. Los montajes secos son adecuados para especímenes como muestras de polen, pelo, plumas o materiales vegetales.
Montaje húmedo
En un montaje húmedo, se utiliza una gota de agua para suspender el espécimen entre el portaobjetos y el cubreobjetos. Coloque una muestra en el portaobjetos. Con una pipeta, coloque una gota de agua sobre la muestra. A continuación, coloque el borde del cubreobjetos sobre la muestra y baje con cuidado el cubreobjetos con un palillo de dientes o equivalente. Este método ayudará a evitar que las burbujas de aire queden atrapadas bajo el cubreobjetos.
Su objetivo es tener suficiente agua para llenar el espacio entre el cubreobjetos y el portaobjetos. Si hay demasiada agua, el cubreobjetos se deslizará. Coja un trozo de toalla de papel y manténgalo cerca de uno de los bordes del cubreobjetos. De este modo, sacará algo de agua. Si está demasiado seco, añade una gota de agua al lado del cubreobjetos. Practica esto hasta que te acostumbres.
Los montajes húmedos son adecuados para estudiar organismos ligados al agua, como el paramecio, o fluidos corporales como la saliva, la sangre y la orina.
Montaje de sección
En un montaje de sección, se utiliza una sección transversal extremadamente fina de un espécimen. Utilizando un micrótomo, corte un corte fino de su espécimen seleccionado, como una cebolla, y colóquelo cuidadosamente en su portaobjetos. A continuación, siga las instrucciones para un montaje en seco o en húmedo. A menudo se puede aplicar una tinción directamente a la muestra antes de cubrirla con un cubreobjetos.
Los montajes en sección son útiles para una amplia variedad de muestras, como frutas, verduras y otros sólidos que pueden cortarse en pequeñas rodajas.
Permeabilización
Un frotis se realiza untando cuidadosamente una fina capa de la muestra en un portaobjetos y aplicando después un cubreobjetos. Normalmente, un frotis debe dejarse secar al aire antes de aplicar una tinción.
TANCHAS
Las tinciones se utilizan para ayudar a identificar diferentes tipos de células utilizando microscopios de luz. Dan más contraste a la imagen y permiten clasificar las células según su forma (morfología). Utilizando una variedad de tinciones diferentes, se pueden teñir selectivamente diferentes áreas, como la pared celular, el núcleo o la célula entera. Las tinciones también pueden ayudar a diferenciar entre células vivas o muertas.
Las tinciones tienden a agruparse como neutras, ácidas o básicas, dependiendo de su composición química y atraerán o repelerán a diferentes organismos en consecuencia. Por ejemplo, los científicos y los profesionales de la salud utilizan el azul de metileno, una tinción ligeramente alcalina, para revelar la presencia de ácido desoxirribonucleico, más conocido como ADN.
Tipos de tinción
El yodo es una de las tinciones más comunes y se utiliza para identificar el almidón en una variedad de muestras. Teñirá los carbohidratos en plantas y especímenes animales de color marrón o negro azulado. El glucógeno se mostrará de color rojo.
El azul de metileno es una tinción alcalina útil para identificar núcleos celulares ácidos y ADN en muestras de animales, bacterias o sangre. También es útil en los acuarios para evitar la propagación de infecciones fúngicas en los peces. Ver más detalles >
La eosina Y es una tinción ácida que tiñe de rosa las células alcalinas (citoplasma, por ejemplo). Tiñe de rojo para las células sanguíneas, el citoplasma y las membranas celulares. Los usos médicos más importantes de la eosina son en los análisis de sangre y de médula ósea, incluyendo el frotis de PAP. Ver más detalles >
La tinción de Gram es uno de los procesos más utilizados en la identificación de bacterias – se utiliza a diario en los hospitales. Es una prueba primaria que divide de forma rápida y rentable las bacterias en uno de los dos tipos: Gram positivas o Gram negativas. Ver más detalles >
Pasos de la prueba
- Prepare un portaobjetos de montaje húmedo.
- Recoja una gota de tinción con un gotero o pipeta.
- Ponga una gota de tintura en un borde exterior de su cubreobjetos.
- Coloque un trozo de servilleta o toalla de papel contra el lado opuesto de su cubreobjetos, justo contra el borde. Esto ayudará a que la mancha pase por debajo del cubreobjetos y a través del espécimen.
- Es posible que tenga que añadir otra gota para asegurar una cobertura completa.
- El portaobjetos ya está listo para su visualización.
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